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产品简介
| 品牌 | LABLEAD | 货号 | F0202O |
|---|---|---|---|
| 供货周期 | 现货 |
反转录试剂盒(Primer Flexible)
产品货号:F0202O
存储条件:-20°C
产品组分:
| 组分 | 规格 |
| RTase III Primer Flexible All-in-One Mix | 400 μl |
| Oligo(dT)20VN (50 μM) | 100 μl |
| Random hexamers (50 μM) | 100 μl |
| Nuclease-Free Water | 2×1 ml |
产品简介
RTase III Primer Flexible All-in-One Mix是一款高效、便减少污染的高质量一链cDNA合成预混液, 包含M-MLV GIII Reverse Transcriptase及其反应 Buffer、RNA 酶抑制剂、dNTPs等一链 cDNA 合成所需的多种组分,还需加入RNA 模板、引物和水即可开始反应,操作非常方便。针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物,满足多样化的实验需求,可根据不同实验场景选择Oligo(dT)20VN 或Random hexamers 或 Gene Specific Primers。使用该逆转录预混液 15 分钟内最长可获得12 kb大小的cDNA。
使用方法
1.于冰上配制如下反应体系:
| 试剂 | 使用量 |
| 模板 RNAa | 50 ng~1 μg |
| RTase III Primer Flexible All-in-One Mix | 4 μl |
| Oligo(dT)20VN (50 μM) | 1 μl |
| 或 Random hexamers (50 μM) | 1 μl |
| 或 Gene Specific Primers (50 μM) | 0.1 μl |
| Nuclease-Free Water | To 20 μl |
a.推荐使用试剂盒提取的已去除基因组 DNA 污染的高质量 RNA 作为模板。
2.轻柔吸打混匀,瞬离;
3.55℃温育 15 min;
注:若目标 RNA 不含 Poly(A) 结构,可预先 25℃温育 10 min。
4.反应结束后,85℃温育 5 min 以终止反应;
5.将获得的cDNA 溶液置于冰上,用于后续实验;或立即保存于 -20℃。
注:
1.后续实验为克隆实验,若RNA 来源于真核生物,只需使用 Oligo (dT) VN 即可, 加入 Random hexamers 会降低全长 cDNA 的产量;若 RNA 来源于原核生物,只需使用 Random hexamers 或 Gene Specific Primers。
2.后续实验为qPCR,请同时加入Oligo(dT) VN和Random hexamers以获得mRNA不同位置逆转录效率均一的cDNA。
注意事项
为了防止 RNase 污染,请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证 RNasefree。