Ni NTA Beads 6FF(镍填料)属于一类金属螯合介质，以高流速琼脂糖为基质，以次氮基三乙酸(NTA)或亚氨基二乙酸(IDA)为配基，并鳌合金属离子Ni2+而形成的一种亲和层析介质。该亲和介质不仅具有吸附容量大、选择性好、分辨率高、超低限度的Ni产泄露、易于再生、成本低等优点，还有利于保持产品的生物活性和提高产品的收率，从而广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。

Ni NTA Beads 6FF

产品货号：N30210

储存条件：2-8℃

产品简介

LABLEAD的Ni亲和层析介质属于一类金属螯合介质，以高流速琼脂糖为基质，以次氮基三乙酸(NTA)或亚氨基二乙酸(IDA)为配基，并鳌合金属离子Ni²⁺而形成的一种亲和层析介质。该亲和介质不仅具有吸附容量大、选择性好、分辨率高、超低限度的Ni产泄露、易于再生、成本低等优点，还有利于保持产品的生物活性和提高产品的收率，从而广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化，尤其是zu氨酸标记蛋白质的高效制备。

Ni NTA Beads 6FF产品特点：

可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件，适用性更广，配体更稳定，选择性更高；

可耐受最高0.3MPa的压力，更稳定，可在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。

产品性能

操作说明

Ni NTA Beads 6FF可以在实验室被填装到HiQumnR中压层析柱中，以扩大产量。将填料填装到层析柱中，根据样本量和填料载量选择合适的层析柱和柱高。

1.1缓冲液准备

所用缓冲液需采用高纯水配制，使用前建议用0.45um滤膜过滤。

平衡缓冲液：20 mM Tris-HCI 500mM NaCl， pH=7.4

洗涤缓冲液：20 mM Tris-HCI 500mM NaCl，10 mM咪唑，pH=7.4

洗脱缓冲液：20 mM Tris-HCl 500mM NaCl，500 mM咪唑，pH=7.4

1.2样品准备

为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。

1.3 样品纯化

1)平衡：用5~10CV的平衡缓冲液平衡层析柱，至流出液电导和pH不变(与平衡液一致)。对于结合力较强的带zu氨酸标记的蛋白质，平衡缓冲液中可加入低浓度(20~40 mM)的咪唑。

2)进样：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析，高浓度样品溶液可用平衡液稀释。

3)淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。

4)洗脱：

洗脱一般有两种方式，

一是采用竞争试剂，例如咪唑(0~0.5M)、zu氨酸(0~0.05M)、氯化铵(0~2M)等将蛋白质从柱子上置换下来；

二是减小pH值，洗脱目标蛋白，大多数蛋白质在pH4~6的范围内可被洗下来。用竞争试剂咪唑或减小pH值的方法洗脱蛋白质，金属离子仍结合在柱子上；若用竞争试剂zu氨酸或氯化铵洗脱蛋白质，会将金属离子和蛋白质的复合物一起洗下来。

注：

①为了减少杂蛋白在层析柱上的吸附，可在确保目标蛋白吸附的情况下适当增加样品缓冲液中的咪唑。对于包涵体蛋白，相应的可在平衡、上样和洗脱的缓冲液中加入8MUrea或6MGua-HCl

②洗脱缓冲液中必须加入0.15~1.0M NaCl，以消除离子交换作用。梯度洗脱最好在起始平衡液的恒定pH下进行，可采用线性梯度或阶越式梯度洗脱。

5)再生：介质使用数次(具体与样品特性、样品体积、金属离子等有关)后，或者螯合其他金属离子前，需要进行再生处理。

首先用2~3CV的0.1M EDTA+0.5M NaCl pH7.0清洗柱子，并用2~3CV以上的0.5MNaCl溶液清洗，除去主柱上残留的EDTA，然后再螫合相应的金属离子。

若有变性蛋白质或脂类物质在再生过程中未能有效去除，可用原位清洗(CIP)的方法除去。

2原位清洗

为了避免不同样品间的相互干扰，或者当介质污染比较严重时(反压增加)，需要对介质进行在位清洗。在位清洗前，需要预先除去介质上螯合的金属离子(见再生操作)。在位清洗时，可采用反向冲洗的方法。

1)对于以离子键结合的蛋白，可用2~3CV以上的2MNaCl清洗，并用3CV以上的纯水冲洗。

2)对沉淀蛋白、以疏水性结合的蛋白或脂蛋白，可用1MNaOH清洗(1~2h)，并用3~10 CV平衡液和3CV以上的纯水冲洗。

3)对疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质，可用5~10CV的70%乙醇或30%异丙醇清洗(20min以上)，并用3~10CV的纯水冲洗。

此外，也可用2CV含去污剂的碱性或酸性溶液清洗。如用0.1~0.5%的非离子去污剂+0.1M乙酸冲洗1~2h，并用5~10CV的70%乙醇冲洗去除去污剂，然后用3~10CV的纯水冲洗。

重要提示：如果使用Xtrap预装柱，可省略装柱步骤。