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  • 无细胞蛋白表达系统多以细胞裂解液为基础,去除基因组DNA、RNA和蛋白质,保留转录和翻译必需的组分,再添加入含有能量系统、氨基酸等底物的缓冲液系统。用户加入自己的目的基因,在一定温度下孵育或恒温振荡一定时间即可完成蛋白的表达。通常包含细胞提取物(如大肠杆菌裂解液、小麦胚芽提取物、昆虫细胞裂解液等,提供转录和翻译所需的酶、核糖体等成分)、能量源(如ATP、GTP等)、氨基酸、辅因子、缓冲液系统,部分试剂盒还会提供线性模板、质粒载体、分子伴侣、氧化还原缓冲液等特殊组分。无细胞蛋白...
    2025-12-13
  • DAB(3,3'-二氨基联苯胺)显色试剂盒是免疫组化、原位杂交等实验中常用的显色工具,但其操作涉及潜在致癌物和强氧化剂,需严格遵循安全规范。以下是使用DAB显色试剂盒时的关键注意事项,涵盖安全防护、实验优化、存储管理及废弃物处理等方面:一、安全防护:严格规避暴露风险个人防护装备(PPE)实验全程穿戴实验服、一次性手套(推荐丁腈或乳胶材质)和护目镜,避免皮肤或黏膜接触试剂。在通风橱或生物安全柜内操作,减少吸入挥发性物质(如DAB粉末或H₂O₂蒸气)。试剂处理规范DAB粉末:具有...
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    2025-10-22
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  • IP/COIP常见问题1、设置实验对照阳性对照:input,即裂解后的上清,判断目的蛋白是否表达。阴性对照:和ip抗体同型的IgG。2、抗体、样本、beads的加入顺序①抗体先与蛋白结合,再加入beads;②抗体先与beads孵育,最后加入蛋白;③抗体、样本和beads同时加入。一般情况下①和②相差不大,如果蛋白量过高,比如大于1000ug,建议使用第二种,否则蛋白容易吸附在磁珠上,降低得率。3、beads磁珠和琼脂糖珠如何选择琼脂糖珠:需要离心,操作繁琐;吸走上清时容易吸走...
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