实验室“老手”教你如何分装与保存反转录试剂

更新时间：2025-10-16

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　　在分子生物学实验中，反转录试剂是开展RT-PCR、基因表达分析等实验的核心耗材，其活性与稳定性直接决定实验结果的可靠性。不少新手因分装操作不当、保存条件不符，导致试剂失效、实验重复失败，既浪费资源又延误研究进度。作为实验室“老手”，结合多年实操经验，我总结了反转录试剂分装与保存的关键要点，帮你避开常见“坑”。

　　一、分装前：做好准备，避免“开局错”

　　反转录试剂成分复杂，含逆转录酶、dNTPs、缓冲液等，对温度、污染极为敏感，分装前的准备工作至关重要。首先要提前规划用量，根据日常实验频率确定分装体积——若每周实验3-5次，建议将1mL规格试剂分装入10-20个200μL离心管，避免单次分装过多反复冻融；若实验频次低，可采用50μL小体积分装，减少试剂暴露次数。

　　其次需提前准备专用耗材与设备：离心管选择无酶、无RNA酶的进口品牌（如Axygen、Eppendorf），避免国产劣质管残留的酶抑制剂影响活性；移液器需校准，枪头同样选用无酶款，且提前在超净台内紫外线消毒30分钟。同时，将分装用离心管提前标记试剂名称、浓度、分装日期，避免后续混淆。

　　二、分装中：严格控温，操作“稳准快”

　　从-20℃冰箱取出后，需立即放入冰盒（4℃环境），严禁室温放置——逆转录酶在室温下10分钟就可能失活30%以上。分装时全程在超净台内操作，保持手部稳定，避免移液器枪头触碰离心管内壁，防止交叉污染。

　　加样时遵循“慢吸慢打”原则：吸取试剂时移液器按钮按至第一档，待液体缓慢进入枪头后稍作停留，避免产生气泡；加样时枪头贴近离心管底部，缓慢推出液体，减少试剂挂壁。每分装完一支离心管，立即盖紧盖子并放回冰盒，避免长时间暴露在室温下。全部分装完成后，将离心管快速放入-80℃冰箱冷冻30分钟（若长期保存），或直接放入-20℃冰箱短期使用（建议1个月内用完）。

　　三、保存与使用：细节把控，延长“活性期”

　　它的保存温度需严格区分成分：逆转录酶、RNA酶抑制剂等酶类试剂，长期保存需置于-80℃冰箱，短期（1周内）可放-20℃；dNTPs、缓冲液等非酶类试剂，-20℃冰箱即可长期保存。严禁将试剂反复冻融——每次使用时从冰箱取出后，立即放入冰盒，待实验结束后，剩余试剂需在30分钟内放回对应温度冰箱，每支试剂冻融次数不超过3次，否则会导致酶活性急剧下降。

　　此外，保存过程中需注意避光：部分反转录试剂中的dNTPs对光照敏感，长期暴露会发生降解，建议将试剂存放在不透光的试剂盒中，或用铝箔纸包裹离心管。使用前需将试剂在冰盒中缓慢解冻，待全溶解后轻轻颠倒离心管3-5次混匀，避免剧烈振荡（防止酶变性），混匀后短暂离心（5000rpm，10秒），使试剂集中在离心管底部，再进行后续实验。

　　掌握正确的分装与保存方法，不仅能延长它的使用寿命，更能保障实验结果的准确性与重复性。实验室操作无小事，每一个细节的把控，都是科研顺利推进的关键。

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