Alkaline phosphatase detection kit，该测试利用4-甲基伞形酮磷酸酯被ALP水解成高荧光产物4-甲基伞形酮。荧光增加的速率与酶活性成正比。

一般说明

碱性磷酸酶（ALP或AKP）是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶，而是一组同工酶，碱性磷酸酶在碱性环境中催化磷酸酯水解，形成有机自由基和无机磷酸盐。该测试利用4-甲基伞形酮磷酸酯被ALP水解成高荧光产物4-甲基伞形酮。荧光增加的速率与酶活性成正比。检测限度为0.02 U/L。

适用性

直接测定：血清、血浆和其他来源中的ALP 活性。

药物发现：ALP调节剂的高通量筛选。

试剂盒组成

反应试剂：7mL      100x 标准液：120mL

储存: -20°C。

样品制备

ALP在4°C下可稳定48小时，在 -20°C下可稳定2个月。 EDTA、草酸盐、氟化物、柠檬酸盐是已知的ALP抑制剂，应避免在样品制备中使用。血清、血浆（无EDTA/柠檬酸盐，最好是未溶血的）和细胞培养基可以直接检测。使用前将所有试剂解冻至室温。该测定基于动力学反应。建议使用多通道移液器。向样品中添加试剂应迅速，混合应短暂而彻di。可在室温或37°C下进行检测。

检测步骤

1. 标准：首先将5mL的100x 标准液与495mL蒸馏水混合以获得1x 标准液。将 0、3、6 和 10mL 1x标准品转移到黑色96孔板的单独孔中，并分别向每个标准孔中加入10、7、4 和 0mL蒸馏水，使每个体积达到10mL。

样品： 将10mL样品转移到孔板的单独孔中。

2. 使用多道移液器，将 90 mL反应试剂添加到所有标准和样品孔中。快速轻敲孔板以混合，并在所需温度（例如 25°C）下孵育所需的时间（例如20分钟）。

3.读取荧光强度（l_exc= 360nm, l_em = 450nm）。

4. 计算：根据每个标准在20分钟时测量的荧光值，绘制曲线确定斜率。 样品的 ALP 活性为：

F_样本和 F_空白是样品和空白（即没有标准液孔）的荧光值。 t 是反应时间（例如 20 分钟）。 n 是稀释倍数。 如果计算值高于 10 U/L，则使用较短的孵育时间，或用水稀释样品并重复测定。 将结果乘以稀释倍数n。

单位定义：1 个单位 (U) 的 ALP 在 pH 10.5 和室温 (25°C) 下催化 1mmole的 4-甲基伞形酮磷酸酯转化为 4-甲基伞形酮。

注意事项：

1. 对于ALP活性较低的样品（< 1 U/L），建议将孵育时间延长至例如60分钟。

2. 对于384孔分析，反应体积可以缩小，对于比色皿分析，反应体积可以放大。

3. 本产品仅供研究用，使用过程中应严格遵循实验安全措施。