遗传霉素(Geneticin)是一种结构类似于庆da霉素 B1（Gentamycin B1）的氨基糖苷类抗生素，在分子遗传试验中，是稳定转染zui常用的抗性筛选试剂。它通过抑制转座子 Tn601，Tn5 的基因，干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成， 对原核和真核等细胞产生毒素，包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括 原生动物和蠕虫。

  G418 (Geneticin) 遗传霉素

产品货号：G4180

储存温度：常温运输。-20℃避光保存，有效期 3 年。避免受潮，否则会降低抗生素活力。

产品描述

G418是一种结构类似于庆da霉素 B1（Gentamycin B1）的氨基糖苷类抗生素，在分子遗传试验中，是稳定转染zui常用的抗性筛选试剂，。它通过抑制转座子 Tn601，Tn5 的基因，干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成， 对原核和真核等细胞产生毒素，包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括 原生动物和蠕虫。当抗性基因neo被整合进真核细胞基因组后 , ,则能启动neo基因编码的序列转录为 mRNA，从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达，此酶通过共价修饰 G418 的氨基或羟基功能，抑制抗生素-核糖体间的相互作用，从而使得抗生素失活。这一特性赋予细胞产生抗性。稳转细胞株筛选实验，需要建立杀灭曲线（剂量反应曲线）确定杀死无抗性细胞的最di有效浓度。植物细胞中，通过转染携带 nptII 基因的抗性质粒孵育其抗性。nptII 基因也能编码表达氨基糖苷磷酸转移酶，这个酶使 得多种抗生素丧失活性，包括 G418，卡na霉素和ba龙霉素。

产品性质

英文别名（English synonym）	Antibiotic G418; G418 Sulfate
中文别名（Chinese Synonym）	G418 硫酸盐；遗传霉素
CAS号（CAS NO.）	108321-42-2
分子式（Formula）	C20H40N4O10·2 H2SO4
分子量（Molecular weight）	692.7 g/mol
外观（Appearance）	白色粉末
纯度（Purity）	>700Ug/mg
溶解性（Solubility）	溶于水
结构式（Structure）

使用方法

1. G418 储存液的配制（50 mg/mL，活性浓度）

1）活力单位的换算 根据此公式进行换算：（1000/A0）×A1=A2，其中 A0是 G418 的

活力值（Potency），因批次而异。可见批次对应的质检报告， 或者瓶子上的标签。A1 是想配制的活性 G418 浓度。A2 是实际称重的粉末与体积比浓度。 比如若所用批次的 G418

活力值为：750 U/mg，要配制 50 mg/mL 的 G418 活性浓度，则实际要配制的粉末浓度为 1000/750×50 mg/mL=66.33 mg/mL。 如果配制 10 mL 的 G418 储存液（活性浓度，50 mg/mL），则需要称取 663.3 mg 粉末。

2）除菌和保存 根据上述换算得到的实际粉末称重量，加入 10 mL 无菌去离子水内使其wan全溶解。 先用 5 mL 无菌去离子水预湿润 0.22 μm 针头式过滤器，除尽水。之后使用此滤器过滤，除菌后分装成单次使用的小量（如 1mL）放到-20℃冻存，1 年稳定。                                                                  

【注】①不要对混浊的溶液进行过滤，因为混浊的溶液意味着未wan全溶解，过滤过程中会造成药物损失，降低终液的活性。 ②不建议使用液体培养基，NaCl，磷酸盐溶液或者有机溶剂来制备储存液。

2. 常用筛选浓度

一般来说，刚开始筛选转化子需要高浓度的 G418，并用一个较低浓度的 G418 用于维持培养。生长条件，细胞类型和其他 的环境因素都可能影响 G418 的用量，因此第一次使用的实验体系建议通过杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确 定最佳筛选浓度。 通常情况，哺乳动物细胞筛选范围 200-2000 μg/mL；植物细胞：10-100 μg/mL；酵母细胞：500-1000 μg/mL；

以下是一些细胞类型使用 G418 筛选使用的浓度，可做参考。

3.杀灭曲线的建立

【注】为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最di浓度，可通过建立杀灭曲 线（剂量反应曲线）来实现，至少选择 6 个浓度。处理分裂期的细胞时 G418 的活性最qiang，因此在添加 G418 之前需 要让细胞培养一段时间。

1）第一天：未转化的细胞按照 20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2 培养过夜；

【注】对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。

2）根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定 0，50，100，200，400，800，1000 μg/mL。

3）第二天：去除旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

4）接下来每 3-4 天更换新的含药物培养基。

5）按照固定的周期（如每 2 天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是 7-10 天）内能够杀死绝大多数细胞的最di浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

4. 稳定转染细胞的筛选

1）转染 48 h 后，用含有适当浓度的 G418 筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。

【注】细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果zui 好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到jiao好的筛选效guo，最 好将细胞稀释至丰度不超过 25%。

2）每隔 3-4 天更换含有药物的筛选培养液。

3）筛选 7 天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞 类型，转染，以及筛选效果。

4）挑取并转移 5-10 个抗性克隆于 35 mm 细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养 7 天。

5）之后更换正常培养基培养即可。

注意事项

1）本品不可高压灭菌；

2）G418不要和其他的抗生素/抗真菌剂（如qing霉素/lian霉素）共同使用，因为它们是G418的竞争性抑制剂。其他的抗生素也 会产生交叉活性。

3）配制G418溶液时，一定要根据G418批次不同的活力值（potency）来进行换算，从而得到需要活性浓度的储存液以及工作液。

4）G418加入培养体系中未转染的细胞有可能不会被杀死，原因在于药物浓度过低，或者细胞密度过高。另外，快速分裂的细胞相对于缓慢增殖细胞，更容易被杀死。对照细胞（未转染）可能抗生素添加5-7天后才能杀死，转染细胞（抗性克隆子）的克隆需要10-14天形成。

5）即使加入杀死剂量的G418，细胞可能会继续分裂2-3次。G418的药效通常在2天后才变得明显。

6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。