Ni TED Beads 6FF(镍填料)，以高流速琼脂糖为基质，以IDA、NTA、TED为配基，并鳌合金属离子Ni2+而形成的一种亲和层析介质，因整合方式不同，Ni2+离子结合力也存在细微差距，在对不同蛋白的纯化过程中表现出不同的选择性，广泛用于His标签蛋白的分离纯化，其中Ni-TED beads 6FF可耐受100mM EDTA和10mM DTT。

Ni-TED beads 6FF

货号：N30250

存储条件：4-30℃

产品说明

LABLEAD的Ni亲和层析介质属于一类金属鳌合介质，以高流速琼脂糖为基质，以IDA、NTA、TED为配基，并鳌合金属离子Ni²⁺而形成的一种亲和层析介质，因整合方式不同，Ni²⁺离子结合力也存在细微差距，在对不同蛋白的纯化过程中表现出不同的选择性，广泛用于His标签蛋白的分离纯化，其中Ni-TED beads 6FF可耐受100mM EDTA和10mM DTT。在含有EDTA及DTT的情况下直接进行目的蛋白纯化，此介质的清洗再生工作简单，无需脱镍直接进行NaOH清洗。

技术指标

操作说明

Ni-TED Chromrose 6FF可以在实验室被填装到中压层析柱中，以扩大产量。将填料填装到层析柱中，根据样本量和填料载量选择合适的层析柱和柱高。

1. 缓冲液准备

所用缓冲液需要采用高纯水配制，使用前建议用0.45um滤膜过滤。

平衡缓冲液：0.2M NaCl，50mM Tris-Hcl，0.1mM EDTA，PH=7.4

漂洗缓冲液：0.2M NaCl，50mM Tris-Hcl，0.1mM EDTA，30mM咪唑，PH=7.4

洗脱缓冲液：0.2M NaCl，50mM Tris-Hcl，0.1mM EDTA，500mM咪唑，PH=7.4

2. 样品准备

样品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液进行裂解、透析/超滤/G25进行缓冲液置换。

样品过滤(平均粒径<45um，用0.22um过滤；45um<平均粒径<165um，用0.45um过滤；平均粒径>165um，用0.8um过滤)。

3. 样品纯化

3.1 用3~5CV的纯水冲洗出存储缓冲液；

3.2 用5~10CV的平衡缓冲液平衡层析柱，至流出液电导与pH不变(与平衡液一致)；

3.3 利用泵或者上样环上样；

3.4 上样完毕后用淋洗缓冲液冲洗10~15CV，至基线稳定

3.5 用洗脱缓冲液采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱一般55CV，梯度洗脱可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积来分离不同结合强度的蛋白；

3.6 依次用3CV平衡缓冲液，5CV纯水，2CV 20%乙醇冲洗层析柱后，置于2~8°C保存。

4. 在位清洗

当填料在使用过程中发现反压过高或者填料上出现明显污染，需要进行在位清洗操作。

4.1 去除强疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类

方法一: 使用30%异丙醇清洗5~10CV，接触时间为15~20min可以去除此类污染物，再用10CV的纯水清洗；

方法二: 使用0.3M或0.5M NaOH溶液冲洗填料3CV，然后用1015CV的纯水清洗。

4.2 去除离子作用结合的蛋白

使用1.5M NaCl溶液清洗10~15min，再用10CV纯水清洗，清洗好的柱子用2CV的20%乙醇冲洗，置于2~8°C保存

图 1Ni-TED beads 6FF 纯化qing霉素酶发酵液电泳图