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当前位置:首页产品中心蛋白研究蛋白纯化N30250-10mlNi TED Beads 6FF(镍填料)

Ni TED Beads 6FF(镍填料)
产品简介

Ni TED Beads 6FF(镍填料),以高流速琼脂糖为基质,以IDA、NTA、TED为配基,并鳌合金属离子Ni2+而形成的一种亲和层析介质,因整合方式不同,Ni2+离子结合力也存在细微差距,在对不同蛋白的纯化过程中表现出不同的选择性,广泛用于His标签蛋白的分离纯化,其中Ni-TED beads 6FF可耐受100mM EDTA和10mM DTT。

产品型号:N30250-10ml
更新时间:2023-11-26
厂商性质:代理商
访问量:484
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品牌其他品牌供货周期现货
应用领域食品/农产品,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药

Ni-TED beads 6FF

货号:N30250

存储条件:4-30℃


产品说明

LABLEADNi亲和层析介质属于一类金属鳌合介质,以高流速琼脂糖为基质,以IDA、NTA、TED为配基,并鳌合金属离子Ni2+而形成的一种亲和层析介质,因整合方式不同,Ni2+离子结合力也存在细微差距,在对不同蛋白的纯化过程中表现出不同的选择性,广泛用于His标签蛋白的分离纯化,其中Ni-TED beads 6FF可耐受100mM EDTA和10mM DTT。在含有EDTA及DTT的情况下直接进行目的蛋白纯化,此介质的清洗再生工作简单,无需脱镍直接进行NaOH清洗。

技术指标

名称

Ni-TED beads 6FF

配基

(甲基)乙二胺(TED)

基质

6%高度交联琼脂糖

鳌含量

30~60umol/mL

载量(每ml)

30mg His标签蛋白

平均粒径

90um分布45~165um

推荐流速

150~600cm/h (根据柱子规格选择合适流速)

最大耐压

0.3MPa

pH稳定性

3~12(工作) 2~14(清洗)

化学稳定性

0.01M盐酸、0.01M氢氧化钠(一周)

100mMEDTA、10mM DTT、1M氢氧化钠、8M 尿素、6M盐酸(24小时)

100mMEDTA、0.5M咪(2小时)30%异两醇(20分钟)。

应用

用于生物制药和生物工程下游蛋白质、及多肤的分离纯化尤其是zu氨酸标记蛋白质的高效制备


操作说明

Ni-TED Chromrose 6FF可以在实验室被填装到中压层析柱中,以扩大产量。将填料填装到层析柱中,根据样本量和填料载量选择合适的层析柱和柱高。

1. 缓冲液准备

所用缓冲液需要采用高纯水配制,使用前建议用0.45um滤膜过滤。

平衡缓冲液:0.2M NaCl,50mM Tris-Hcl,0.1mM EDTA,PH=7.4

漂洗缓冲液:0.2M NaCl50mM Tris-Hcl,0.1mM EDTA,30mM咪唑,PH=7.4

洗脱缓冲液:0.2M NaCl,50mM Tris-Hcl,0.1mM EDTA,500mM咪唑PH=7.4

2. 样品准备

样品所在溶液要和平衡液保持一致,可以用平衡液进行裂解、透析/超滤/G25进行缓冲液置换。

样品过滤(平均粒径<45um,0.22um过滤;45um<平均粒径<165um,0.45um过滤;平均粒径>165um,0.8um过滤)。

3. 样品纯化

3.1 3~5CV的纯水冲洗出存储缓冲液;

3.2 5~10CV的平衡缓冲液平衡层析柱,至流出液电导与pH不变(与平衡液一致);

3.3 利用泵或者上样环上样;

3.4 上样完毕后用淋洗缓冲液冲洗10~15CV,至基线稳定

3.5 用洗脱缓冲液采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱一般55CV,梯度洗脱可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积来分离不同结合强度的蛋白;

3.6 依次用3CV平衡缓冲液,5CV纯水,2CV 20%乙醇冲洗层析柱后,置于2~8°C保存。

4. 在位清洗

当填料在使用过程中发现反压过高或者填料上出现明显污染,需要进行在位清洗操作。

4.1 去除强疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类

方法一: 使用30%异丙醇清洗5~10CV,接触时间为15~20min可以去除此类污染物,再用10CV的纯水清洗;

方法二: 使用0.3M或0.5M NaOH溶液冲洗填料3CV,然后用1015CV的纯水清洗。

4.2 去除离子作用结合的蛋白

使用1.5M NaCl溶液清洗10~15min,再用10CV纯水清洗,清洗好的柱子用2CV的20%乙醇冲洗,置于2~8°C保存

1Ni-TED beads 6FF 纯化qing霉素酶发酵液电泳图



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