DAB显色试剂盒的注意事项

更新时间：2025-11-18

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　　DAB(3,3'-二氨基联苯胺)显色试剂盒是免疫组化、原位杂交等实验中常用的显色工具，但其操作涉及潜在致癌物和强氧化剂，需严格遵循安全规范。以下是使用DAB显色试剂盒时的关键注意事项，涵盖安全防护、实验优化、存储管理及废弃物处理等方面：

　　一、安全防护：严格规避暴露风险

　　个人防护装备(PPE)

　　实验全程穿戴实验服、一次性手套(推荐丁腈或乳胶材质)和护目镜，避免皮肤或黏膜接触试剂。

　　在通风橱或生物安全柜内操作，减少吸入挥发性物质(如DAB粉末或H₂O₂蒸气)。

　　试剂处理规范

　　DAB粉末：具有潜在致癌性，称量时需在通风橱内进行，避免粉尘扩散。若不慎接触皮肤或眼睛，立即用大量清水冲洗，并寻求医疗帮助。

　　H₂O₂溶液：强氧化剂，可能腐蚀皮肤或衣物。配制DAB工作液时，避免与金属器械直接接触，防止加速分解。

　　显色液配制

　　严格按说明书比例混合A液(浓缩DAB)与B液(含H₂O₂的稀释液)，避免浓度偏差导致显色异常。

　　显色液需现配现用，避光保存。若工作液颜色过深(如深棕色)，说明DAB已部分氧化，需丢弃并重新配制。

　　二、实验优化：控制显色质量的关键参数

　　预实验验证

　　使用时，通过梯度实验确定最佳抗体浓度、抗原修复条件及显色时间。例如：

　　抗体浓度：从推荐浓度开始，按1:50、1:100、1:200稀释测试。

　　显色时间：从1分钟起，每30秒观察一次，至信号清晰且背景可控时终止。

　　背景控制策略

　　非特异性结合：优化封闭步骤(如延长封闭时间、增加封闭液浓度)，或使用更特异的抗体。

　　显色过深：缩短显色时间、降低抗体浓度，或改用更温和的洗涤液(如含0.05% Tween-20的TBS)。

　　信号不均：确保样本处理一致(如切片厚度、抗原修复条件)，显色液均匀覆盖样本。

　　终止反应时机

　　显微镜下观察显色进度，达到预期深浅后立即用蒸馏水或PBS终止反应，避免过度显色。

　　三、存储管理：延长试剂有效期

　　未开封试剂盒

　　保存于2-8℃避光环境，避免温度波动或光照导致DAB分解。

　　已开封试剂

　　A液(浓缩DAB)：分装后密封，-20℃保存，避免反复冻融(建议单次使用量分装)。

　　B液(稀释液)：4℃保存，若含H₂O₂需注意有效期(通常6个月内使用)。

　　混合后的工作液：不可保存，需立即使用并丢弃剩余液体。

　　四、废弃物处理：符合生物安全规范

　　含DAB的废弃物

　　包括使用过的移液器枪头、吸水纸、手套及显色液等，需按实验室生物安全规定处理。

　　推荐方法：装入专用生物危害袋，标注“含潜在致癌物”，交由专业机构处理。

　　废液处理

　　含DAB或H₂O₂的废液需用大量水稀释后，按化学废液流程处理，避免直接排入下水道。

　　五、其他注意事项

　　避免交叉污染

　　不同样本或试剂间使用独立移液器枪头，防止HRP标记抗体或DAB残留干扰结果。

　　复染与封片

　　若需复染(如苏木素染细胞核)，确保DAB显色终止后进行，避免复染液影响显色信号。

　　封片时使用中性树脂，避免使用含有机溶剂的封片剂(可能溶解DAB沉淀)。

　　长期保存样本

　　DAB显色后的切片可长期保存于4℃避光环境，但建议尽快观察并记录结果，以防信号褪色。