BCA蛋白定量试剂盒
BCA（Bicinchoninic acid）法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，产生一种紫蓝色复合物，在562nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。

BCA蛋白浓度测定试剂盒

货号：B5001

存储条件：冰袋运输。试剂盒中A、B液室温或4℃保存；蛋白标准品（BSA）置于4℃保存，有效期2年。

产品规格：

BCA试剂A   100ml

BCA试剂B   3ml

蛋白标准品   2x1ml (5mg/ml)

PBS溶液     10ml

产品描述

BCA（Bicinchoninic acid）法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，产生一种紫蓝色复合物，在562nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。该BCA蛋白浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测，也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量（100μL）的蛋白样品，但由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20（v/v），从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便，仅需少量（10-25μL）的蛋白样品。不过，由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:8（v/v），某种程度上限制干扰物质的承受浓度以及降低最di检测水平。

产品特点

1）灵敏度高，最小检测蛋白量可达0.2μg，检测浓度下限达10μg/mL(在20~1000μg/ml 浓度范围内有较好的线性关系）。

2）速度快，比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry法检测速度约快4倍。

3）线性范围广，20-1000μg/mL浓度范围内有较好的线性范围。

4) 不受大部分样品中的化学物质的影响, BCA法测定蛋白浓度的最da优点是蛋白浓度的测定可以耐受高浓度的去垢剂, 可以兼容样品中高达5%的SDS; 5%的Triton X- 100; 5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM; β-巯基乙醇低于0.01%。

操作说明

BCA 工作液配制：

将试剂A和试剂B按照体积比50:1比例混合配成BCA工作液。取50mL试剂A与1mL试剂B混合，配成51mL BCA工作液。两者混合时会有沉淀形成，彻di混匀后沉淀消失。

微孔板测定程序：（工作范围 20-2000 μg/ml）

1. 蛋白标准品配制：室温wan全溶解蛋白标准品， 取 20µl 5mg/ml BSA 蛋白标准溶液用 PBS 溶液稀释至 100µl使其终浓度为 1.0 mg/ml。

2. 按照下表配制 BSA 标准测定溶液：

3. 将适当体积的待测样品加入到微孔板中，并用 PBS 补足到 20 µl

4. 向微孔板中加入200μL BCA工作液混匀, 37 ℃放置30分钟； 注：也可以室温放置2小时,或 60 ℃放置30分钟。BCA 法测定蛋白浓度时,颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低, 适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间。

5. 测定 562 nm处的吸光值， 并记录读数； 以不含BSA的样品的光吸收值作为空白对 照。

6. 以A562为纵坐标, BSA含量为横坐标, 绘制标准曲线, 计算样品中的蛋白浓度. 如果蛋白浓度不在标准曲线范围内, 请稀释样品后重新测定。

试管测定程序：（工作范围 20-1000 μg/ml）

1. 蛋白标准品配制：室温wan全溶解蛋白标准品, 取150µL 5mg/ml BSA蛋白标准溶液,加入600μL PBS溶液稀释至750µl，使其终浓度为1.0 mg/ml。

2、按照下表配制 BSA 标准测定溶液：

3. 将适当体积的待测样品加入到试管中，并用 PBS 补足到100 µl；

4. 向试管中加入 2ml BCA 工作液，混匀，37 ℃放置30分钟；

5 、6 步骤同上。

6. 注意事项

1）BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，显色反应的速度和温度有关，需注意保持定时和定温，以确保精确定量。

2）长期保存，若发现BCA试剂A或者试剂B有沉淀发生。请37ºC温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染，则应丢弃。

3）实验操作规范，提高上样量的精确度。

4）每次测定都需做相应的标准曲线，因为显色反应与温度和时间的变化有关，精准蛋白定量宜每次都做标准曲线。

5）本公司所有产品仅限用于研发，必须专业人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程！