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当前位置:首页产品中心蛋白研究蛋白纯化N30230-10mlNi IDA Beads 4FF(镍填料)

Ni IDA Beads 4FF(镍填料)
产品简介

Ni IDA Beads 4FF(镍填料)属于⼀类⾦属螯合介质,以⾼流速琼脂糖为基质,以次氮基三⼄酸(NTA)或亚氨基⼆⼄酸(IDA)为配基,并螯合⾦属离⼦Ni2+⽽形成的⼀种亲和层析介质。该亲和介质不仅具有吸附容量⼤、选择性好、分辨率⾼、超低限度的Ni2+泄露、易于再⽣、成本低等优点,还有利于保持产品的⽣物活性和提⾼产品的收率,从⽽⼴泛⽤于⽣物制药和⽣物⼯程下游蛋⽩质、核酸及多肽的分离纯化。

产品型号:N30230-10ml
更新时间:2023-11-26
厂商性质:代理商
访问量:369
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品牌其他品牌供货周期现货
应用领域食品/农产品,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药

Ni IDA Beads 6FF

产品货号:N30230

储存条件:2-8℃(20%⼄醇)


产品简介

LABLEAD的Ni亲和层析介质属于⼀类⾦属螯合介质,以⾼流速琼脂糖为基质,以次氮基三⼄酸(NTA)或亚氨基⼆⼄酸(IDA)为配基,并螯合⾦属离⼦Ni2+⽽形成的⼀种亲和层析介质。该亲和介质不仅具有吸附容量⼤、选择性好、分辨率⾼、超低限度的Ni2+泄露、易于再⽣、成本低等优点,还有利于保持产品的⽣物活性和提⾼产品的收率,从⽽⼴泛⽤于⽣物制药和⽣物⼯程下游蛋⽩质、核酸及多肽的分离纯化,尤其是zu氨酸标记蛋⽩质的⾼效制备。


产品特点

使用耐压基质,可以耐受最高0.3M Pa的压力,更稳定,因此该产品更适合用于工业大规模蛋白的纯化,可以在相对较高的流速下实现对目的蛋白的纯化。


相关数据

名称

Ni-IDA beads 6FF

配基

亚氨基二乙酸(IDA)

基质

6%高度交联琼脂糖

鳌含量

30~60umol/mL

载量(每ml)

40mg His标签蛋白

平均粒径

90um,分布45~165um

推荐流速

150~600cm/h(根据柱子规格选择合适流速)

最大耐压

0.3MPa

pH稳定性

3~12(工作)2~14(清洗)

化学稳定性

40°C放置⼀周:0.01M HCl,0.1M NaOH;

12h:1M NaOH,70%⼄酸;

1h:2% SDS

30min:30%异丙醇

应用

用于生物制药和生物工程下游蛋白质、及多肤的分离纯化,

尤其是zu氨酸标记蛋白质的高效制备

操作说明

Ni-IDA Chromrose 6FF可以在实验室被填装到中压层析柱中,以扩大产量。将填料填装到层析柱中,根据样本量和填料载量选择合适的层析柱和柱高。

1. 缓冲液准备

所用缓冲液需要采用高纯水配制,使用前建议用0.45um滤膜过滤。

平衡缓冲液:500mM NaCl,20mM Tris-Hcl,PH=7.4

漂洗缓冲液:500mM NaCl,20mM Tris-Hcl,10mM咪唑,PH=7.4

洗脱缓冲液:500mM NaCl,20mM Tris-Hcl,500mM咪唑,PH=7.4


2样品准备

为了避免堵塞层析柱,样品应经离⼼或微滤处理.进料量根据介质的载量和料液中⽬标蛋⽩的含量计算。

3样品纯化

1)平衡:

5~10CV的平衡缓冲液平衡层析柱,⾄流出液电导和pH不变(与平衡液⼀致)。对于结合⼒较强的带zu氨酸标记的蛋⽩质,平衡缓冲液中可加⼊低浓度(20~40mM)的咪唑。

2)进样:样品缓冲液应尽可能与平衡液⼀致。固体样品可⽤平衡液溶解配制;低浓度样品溶液可⽤平衡液透析,⾼浓度样品溶液可⽤平衡液稀释。

3)淋洗:上样完毕后继续⽤平衡缓冲液淋洗⾄基线。

4)洗脱:洗脱⼀般有两种⽅式,⼀是采⽤竞争试剂,例如咪唑(0~0.5M)、zu氨酸(0~0.05M)、氯化铵(0~2M)等将蛋⽩质从柱⼦上置换下来;⼆是减⼩pH值,洗脱⽬标蛋⽩,⼤多数蛋⽩质在pH4~6的范围内可被洗下来。⽤竞争试剂咪唑或减小pH值的⽅法洗脱蛋⽩质,⾦属离子仍结合在柱⼦上;若⽤竞争试剂zu氨酸或氯化铵洗脱蛋⽩质,会将⾦属离⼦和蛋⽩质的复合物⼀起洗下来。

注:

为了减少杂蛋⽩在层析柱上的吸附,可在确保⽬标蛋⽩吸附的情况下适当增加样品缓冲液中的咪唑。对于包涵体蛋⽩,相应的可在平衡、上样和洗脱的缓冲液中加⼊8M Urea或6M Gua-HCl。

洗脱缓冲液中必须加⼊0.15~1.0M NaCI,以消除离⼦交换作⽤。梯度洗脱最好在起始平衡液的恒定pH下进⾏,可采⽤线性梯度或阶越式梯度洗脱。

5)再生:介质使⽤数次(具体与样品特性、样品体积、⾦属离⼦等有关)后,或者螯合其他⾦属离⼦前,需要进⾏再⽣处理。⾸先⽤2~3 CV的0.1M EDTA和0.5M NaCl pH7.0清洗柱⼦,并⽤2~3CV以上的0.5M NaCl溶液清洗,除去主柱上残留的EDTA,然后再螫合相应的⾦属离⼦。若有变性蛋白质或脂类物质在再生过程中未能有效去除,可用原位清洗(CIP)的方法除去。

4原位清洗

为了避免不同样品间的相互⼲扰,或者当介质污染⽐较严重时(反压增加),需要对介质进⾏在位清洗。在位清洗前,需要预先除去介质上螯合的⾦属离⼦(⻅再⽣操作)。在位清洗时,可采⽤反向冲洗的⽅法。

1)对于以离⼦键结合的蛋⽩,可⽤2~3CV以上的2M NaCl清洗,并⽤3CV以上的纯⽔冲洗。

2)对沉淀蛋⽩、以疏⽔性结合的蛋⽩或脂蛋⽩,可⽤1M NaOH清洗(1~2h),并⽤3~10CV平衡液和3CV以上的纯⽔冲洗。

3)对疏⽔性结合的蛋⽩、脂蛋⽩和脂类物质,可⽤5~10CV的70%⼄醇或30%异丙醇清洗(20min以上),并⽤3~10CV的纯⽔冲洗。

此外,也可⽤2CV含去污剂的碱性或酸性溶液清洗。如⽤0.1~0.5%的⾮离⼦去污剂+0.1M⼄酸冲洗1~2h,并⽤5~10CV的纯⽔冲洗。



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