DAB显色试剂盒操作步骤及注意事项

更新时间：2025-09-15

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　　DAB显色试剂盒是一种基于辣根过氧化物酶(HRP)催化反应的显色试剂盒，广泛应用于免疫组化、原位杂交、Western Blotting、Southern Blotting、Northern Blotting及EMSA等实验中，用于检测HRP标记的抗体或探针结合的靶标。

　　DAB显色试剂盒操作步骤(以组织切片为例)

　　样本准备：

　　组织切片经抗原修复、封闭后，与HRP标记的抗体孵育。

　　洗涤：

　　用TBS或PBS洗涤3-5次，每次3-5分钟，去除未结合抗体。

　　配制DAB工作液：

　　按比例混合A液(浓缩DAB)与B液(稀释液含H₂O₂)，混匀后避光备用。

　　显色：

　　滴加DAB工作液覆盖样本，室温避光孵育1-10分钟，显微镜下观察显色情况。

　　终止反应：

　　用蒸馏水洗涤1-2次，去除残留显色液。

　　后续处理：

　　必要时用苏木素复染细胞核，脱水透明后封片观察。

　　注意事项：

　　安全防护：

　　DAB及H₂O₂具有潜在致癌性，操作时穿实验服、戴手套，避免直接接触皮肤或吸入。

　　避免背景：

　　显色前确保充分洗涤，减少非特异性结合。

　　若背景过深，可缩短显色时间、降低抗体浓度或使用更强洗涤液。

　　显色控制：

　　显色液需现配现用，避光保存。

　　显色时间根据靶标丰度调整，避免过度显色导致信号饱和。

　　兼容性验证：

　　首使用时建议预实验，确定最佳抗体浓度和显色时间。