TEV Protease (with His-tag) 来源于烟草蚀纹病毒，经基因工程改造并在大肠杆菌中重组表达获得，在保留天然TEV酶功能活性的同时，提高了其对pH和温度的耐受性。TEV Protease是一种高度特异性的半胱an酸蛋白酶，常用于切除融合蛋白上的亲和标签。TEV Protease 严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，并在谷an酰胺和甘an酸/丝an酸之间进行切割

货号：T6035

存储条件：-20℃，建议在首ci使用时分装保存，避免反复冻融。

产品说明

TEV Protease (with His-tag) 来源于烟草蚀纹病毒，经基因工程改造并在大肠杆菌中重组表达获得，在保留天然TEV酶功能活性的同时，提高了其对pH和温度的耐受性。TEV Protease是一种高度特异性的半胱an酸蛋白酶，常用于切除融合蛋白上的亲和标签。TEV Protease 严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，并在谷an酰胺和甘an酸/丝an酸之间进行切割，常用的七an基酸序列是Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。TEV Protease (with His-tag) N端带有His标签，使其可以在酶切完成后通过Ni亲和层析去除，以达到纯化目的蛋白的目的。

产品组分

活性定义

1 活性单位 (U) 定义为在1× TEV Buffer中，30℃反应1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量。

储存缓冲液

50 mM Tris-HCl；250 mM NaCl；10 mM DTT；1 mM EDTA；50% Glycerol；pH 7.5 @ 25℃。

质量控制

蛋白纯度

经SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%。

非特异性蛋白酶活性

30℃下，在50 μl反应体系中将10 U TEV Protease (with His tag) 与 3 μg标准蛋白共同温育1 h，通过SDS-PAGE检测蛋白质混合物未降解。

使用说明

1. 在 EP管中配制如下反应体系：

2.  30℃孵育1 h或 4℃过夜（16 h左右）；

3.  向上述EP管中加入16 μl Protein Loading Buffer (SDS, 4×) (REF: G2526)，样品煮沸10 min，取10 μl进行SDS-PAGE分析；

4. 根据酶切结果，优化TEV酶的用量、孵育温度和孵育时间来确定最佳的反应条件。

注意事项

1. 可兼容常见蛋白酶抑制剂，如：抑tai酶、苯甲脒、亮抑酶肽、胃蛋bai酶抑制剂、PMSF等。

2. 可兼容400 mM咪唑、2 M尿素、0.2 M NaCl、10 mM MgSO4、10 mM MnCl2、10 mM CaCl2和高达100 mM的 EDTA。

3. 该酶在有≥40%甘油、≥ 5 mM Zn2+、≥1 mM Cu2+和 ≥10 mM Co2+ 的反应体系活性会受到抑制。

4. TEV 最佳反应条件为pH7.0、30℃，但在pH6~9、4~37℃范围内均有活性，可根据目的蛋白的情况自行选择适宜的反应条件。