产品货号：F7514S

储存条件：-20℃

产品组成

产品简介

Pcil 属于 Type IIP 型限制性内切酶，来源于柠檬色动性球菌(Planococcus citreus)，经大肠杆菌重组表达后获得。Pcil 使用专属反应缓冲液 Cut Buffer C，可实现快速酶切；可兼容LabFD 缓冲液进行双酶切，但长时间反应可能出现星号活性。。

建议反应条件：1×Cut buffer C；37℃温育；参照“DNA 快速酶切流程"配制反应体系。

失活条件：80℃温育 20 min。

活性定义：1 活性单位 (U) 是指在 50 μl 反应体系中，37℃ 1 h内wan全酶切 1 µg p615 所需的酶量。

质量控制

功能活性检测

37℃下，在 20ul 反应体系中，10U PciI 能够在 15min 内wan全消化1ug p615。

超长时间温育检测

37℃下，将 10U PciI 与1ug p615 共同温育 3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测

37℃下，使用 10 U PciI 消化 DNA 底物，回收酶切产物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

使用方法

1.DNA 快速酶切流程

（1）在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

a. DNA 底物中应不含ben酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响PciI酶活性。

（2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

（3）37℃温育 15min~60min；

（4）80℃温育 20 min 即可使酶失活，或者通过吸附柱或ben酚/氯仿纯化终止反应。

2. 注意事项

① 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的 10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性;

② 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂(例如甘油、盐)与底物溶液中的污染物(例如盐、EDTA 或乙醇等)相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。

③ Pcil 可以和其他 LabFD系列限制酶使用 LabFD缓冲液进行双酶切，但不建议长时间(超过3 h)反应。

不同 DNA 中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自 LABLEAD 限制酶标准反应体系下的检测。