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快速内切酶 DpnI
产品简介

LabFD™快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的高保真限制性内切酶,适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。LabFD™ 快速内切酶具有如下特点:5~15 分钟内即可完成酶切;共用一种酶切Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。
快速内切酶 DpnI

产品型号:F5585S-50 rxns
更新时间:2023-11-26
厂商性质:代理商
访问量:287
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品牌其他品牌供货周期现货
应用领域食品/农产品,化工,生物产业,农林牧渔,制药/生物制药

DpnI 快速内切酶

产品货号F5585S

储存条件-20℃    


                                           


同裂酶MalI

同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。


产品组成

组分

规格

LabFD™ DpnI

50ul

10×LabFD™ Buffer

1ml

10×LabFD™ Color Buffer

1ml


产品简介

LabFD™快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的高保真限制性内切酶,适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。LabFD™ 快速内切酶具有如下特点:5~15 分钟内即可完成酶切;共用一种酶切Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,LABLEAD去磷酸化、连接试剂在LabFD™酶切Buffer 中具有100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接"的体验。

建议的反应条件:

1× LabFD™缓冲液;

37℃温育;

参照“DNA快速酶切流程"配制反应体系。

失活条件

80℃温育20min。

质量控制

功能活性检测

最适反应温度下,在20ul反应体系中,1ul LabFD™ DpnI能够在15min 内wanquan消化1ug pUC19 DNA。

超长时间温育检测

最适反应温度下,将1ul LabFDDpnI 1ugpUC19 DNA共同温育3h,未检测到其他核酸酶污或星号活性引起的底物非特异性降解,延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测

最适反应温度下,使用 1ul LabFDDpnI消化底物,回收酶切产物。在22℃下使用适量Fast T4 DNA Ligase可以将酶切产物重新连接将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

非特异性内切酶活性检测

最适反应温度下,将1ul LabFD™ DpnI与1ug超螺旋质粒DNA共同温育4h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒DNA仍然处于超螺旋状态。

蓝白斑检测

将含有单一lacZα基因的载体以1ul LabFD™ DpnI消化,重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞,涂布在含有对应抗生素、IPTG 和X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落,而连接错误(即DNA末端切口不完整)的产物将得到白色菌落。对于LabFD™系列限制酶而言,白色菌落比例应小于1%。

使用方法

1.DNA快速酶切流程

1)在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:


质粒 DNA

PCR 产物

基因组 DNA

ddH2O

15ul

16ul

30ul

10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer

2ul

3uL注

5ul

底物DNA

2ul(up to 1ug)

10ul (~0.2ug)

10ul (5ug)

LabFDDpnI

1ul

1ul

5ul

Total

20ul

30ul

50ul

注:本体系适用于经过纯化的PCR产物酶切,未纯化的PCR具备一定的离子强度,10xLabFDTMbuffer加入量可适当减少至2ul。但由于DNA聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对PCR产物进行纯化。



2)轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;

3)37℃温育15 min(质粒),或15~30 min(PCR 产物),或30~60min(基因组DNA);

4)80℃温育20 min即可使酶失活,停止反应。

2.双酶切或多酶切

1)每种快速内切酶的用量为1ul,并根据需要适当扩大反应体系;

2)所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10;

3)如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。

适用于质粒的扩大反应体系

DNA

1ug

2ug

3ug

4ug

5ug

LabFD™ DpnI

1ul

2ul

3ul

4ul

5ul

10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer

2ul

2ul

3ul

4ul

5ul

Total

20ul

20ul

30ul

40ul

50ul

注:如果总反应体系大于20ul,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

不同 DNA 中的酶切位点数量

λDNA

ΦX174

pBR322

pUC57

pUC18/19

SV40

M13mp18/19

Adeno2

116

0

22

15

15

8

7

87

甲基化修饰影响

Dam

Dcm

CpG

EcoKI

EcoBI

不切割Dam’DNA

无影响

无影响

无影响

序列可能重叠

剪切可能受影响

在不同反应缓冲液中的活性


LabFD™ Buffer

Thermo Scientific FastDigest Buffer

NEB

CutSmart® Buffer

Takara

QuickCut™ Buffer

活性

100%

100%

100%

100%


注:活性数据来自LABLEAD限制酶标准反应体系下的检测




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