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2xTaq PCR Mix(含染料)
产品简介

Taq PCR Mix (含染料) 的浓度为 2×,使用方便快捷,能减少 PCR 操作过程中的污染,使用时只需取适量 2×Taq PCR Mix (含染料),加入模板和引物,并加入 ddH2O 补足体积,使反应体系浓度为 1×,即可进行 PCR 反应。该 Mix 中的 Taq 为筛选获得的突变体 Taq-AS(Advanced Strong) DNA Polymerase,能够高效扩增 ≤5Kb

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更新时间:2022-08-16
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2x Taq PCR Mix(含染料)



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产品说明

Taq PCR Mix (含染料) 的浓度为 2×,使用方便快捷,能减少 PCR 操作过程中的污染,使用时只需取适量 2×Taq PCR Mix (含染料),加入模板和引物,并加入 ddH2O 补足体积,使反应体系浓度为 1×,即可进行 PCR 反应。该 Mix 中的 Taq 为筛选获得的突变体 Taq-AS(Advanced Strong) DNA Polymerase,能够高效扩增 ≤5Kb 的 DNA 片段,具有良好抑制剂耐受能力,其扩增速度约为普通 Taq DNA 聚合酶的 3 倍,因此可大幅度减少 PCR 延伸过程所需要的时间,达到缩短整个 PCR反应的目的。不同于融合蛋白原理的快速 Taq 聚合酶,Taq-AS 的使用更加接近 WT-Taq,不易出现电泳条带弥散、拖带或者片段大小改变等状况。本 PCR Mix 中包含两种染料,PCR 产物无需添加 Loading Buffer 可直接点样电泳,且电泳过程中会出现紫色和黄色两个指示条带。该染料不影响 PCR 扩增效率,但对于需要对 PCR 产物进行吸光度、荧光等光学分析的实验,建议在分析前对 PCR 产物进行纯化。PCR产物 3' 端带 A 碱基,纯化后可直接用于 T/A 克隆。

质量控制

核酸内切酶残留检测

将酶液与超螺旋质粒 DNA 在 37℃ 温育 4h,通过 DNA 电泳检测质粒无变化。

核酸外切酶残留检测

将酶液与双链 DNA 底物在 37℃ 温育 16 h,通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。

稳定性测试

室温存放一周,无明显活性改变。

功能检测

以拟南芥基因组 DNA 和人基因组 DNA 为模板,扩增 5kb 片段,30 个循环后经琼脂糖凝胶电泳检测可见

目的条带。

使用方法

1. 常规PCR反应体系 (冰上操作)

试剂

使用量

终浓度

2×Taq PCR Mix (含染料) a

25μl

正向引物(10 μM)b

1~2μl

0.2~0.4μM

反向引物(10 μM) b

1~2μl

0.2~0.4μM

模板DNAc

Xμl


ddH2O

To 50μl


a. 需溶解*后使用,防止离子浓度不均匀;

b. 引物推荐终浓度为 0.2~0.4μM,效果不佳时可以在 0.1~1μM 浓度范围内进行调整;

c. 不同模板反应浓度有所不同,以 50μl 体系为例:模板为基因组 DNA 时,一般推荐的使用量为 10~400ng;当模板为质粒或病毒 DNA 时,一般推荐的使用量为 10pg~20ng。

2. 三步法 PCR 反应程序

3. 二步法 PCR 反应程序

d. 菌落 PCR 时预变性 ≥5min,更有利于破壁。





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