M-MLV GIII 反转录酶(三代）是通过基因修饰和重组技术获得的第三代M-MLV逆转录酶。该酶相对于野生型M-MLV逆转录酶去除了RNase H活性，并大幅提高了热稳定性（the best反应温度为50℃），从而大大提高了合成first链cDNA时的特异性和长度（最长可达12 kb），增强了对RNA复杂二级结构的耐受性。

货号：M5124

储存条件：-20℃

产品组成

产品简介

M-MLV GIII Reverse Transcriptase是通过基因修饰和重组技术获得的第三代M-MLV逆转录酶。该酶相对于野生型M-MLV逆转录酶去除了RNase H活性，并大幅提高了热稳定性（the best 反应温度为50℃），从而大大提高了合成first链cDNA时的特异性和长度（最长可达12 kb），增强了对RNA复杂二级结构的耐受性。

酶活单位定义

37℃条件下，以Poly(A)-Oligo(dT)为模板/引物，在10 min内， 掺入1 nmol的[³H] dTTP所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

质量控制

宿主原性DNA检测

无宿主DNA污染

核酸内切酶残留检测

将酶液与超螺旋质粒DNA在37℃温育4h，通过DNA电泳检测质粒无变化。

核酸外切酶残留检测

将酶液与双链DNA底物在37℃温育16h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。

使用方法

质粒载体线性化与去磷酸化同步反应流程

1. 于冰上配制如下反应体系：

2. 轻柔吸打混匀后，瞬离；a. 推荐使用试剂盒提取的已去除基因组DNA污染的高质量RNA作为模板。

3. 若使用Oligo(dT)₂₀或基因特异性引物，50℃温育30 min；若使用随机引物，先25℃温育5 min，之后50℃温育30 min；

注：若目的cDNA小于3 kb，温育时间可缩短为15 min。

4. 反应结束后，85℃温育5 min 以终止反应；

5. 将获得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后续实验。

注：cDNA 溶液置于 -20℃可保存半年；置于 -80℃可长期储存