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Product Center品牌 | 其他品牌 | 货号 | PHM025 |
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规格 | 25T | 供货周期 | 现货 |
HA-Magnetic 免疫沉淀试剂盒(PROCAP HA-Magnetic IP/CoIP KIT)
货号:PHM025
存储条件:IP buffer存储于-20°C,HA-Magnetic beads可在4℃保存1年,或在-80℃长期保存。请根据各组分适合储存条件存放,并避免反复冻融。
试剂盒组分:
货号 | 名称 | 规格 |
HNM-25-500 | HA-Nanoab-Magnetic | 1000ul(25T) |
IP001A | 裂解液A | 30ml |
IP001B | 裂解液B | 30ml |
IP001C | 漂洗液C | 30ml |
IP001D | 漂洗液D | 30ml |
IP001E | 洗脱液E | 3x1ml |
CLJ0615 | 磁力架1.5ml,6孔 | 个 |
产品简介:
LABLEAD的免疫沉淀beads是基于基因工程改造的纳米抗体开发的;纳米抗体由传统抗体的重链可变区(VHH)组成,具有分子量小、亲和力高、特异性强,且耐酸碱高温环境等特点;基于纳米抗体的优点,LABLEAD的免疫沉淀beads避免了免疫沉淀结果出现轻重链污染的现象,并且节省实验时间。
实验步骤:
提示:尽量在4℃进行操作,洗脱蛋白方法一除外。
1.收集细胞:
根据实验要求收集适量的细胞,通常每个免疫沉淀反应大约使用 106-107 个细胞。
2.植物组织裂解处理:
取适量植物组织样本(叶片等)放置于冷冻液氮中,之后将冷冻后得植物组织样本放于研钵进行研磨,尽可能充分研磨破坏其细胞壁。加入500-1000ul RIPA 裂解液(已加蛋白酶抑制剂 PMSF 等)进行裂解,为了提高裂解效率,加入 200ul 玻璃粉充分震荡 30min,裂解完成后 12000 rpm,离心 30min,吸取上清 置新的离心管中,弃去沉淀。
3. 裂解细胞:
根据实验要求选择使用溶液A或溶液B裂解细胞。在溶液A或溶液B中加入蛋白酶抑制剂,用500μl预冷的溶液A或溶液B重悬细胞;置于冰上30分钟,可每10分钟充分吹打一次;4℃,20,000g离心15分钟,将裂解产物(上清)转移到一个新的预冷管中,丢弃沉淀。
4. 平衡珠子:
振荡充分混匀珠子, 吸取40μl HA-Nanoab-Magnetic beads到500μl预冷的溶液A或溶液B中,4℃,2,500g离心2分钟,或利用磁性分离,丢弃上清液。
5. 结合蛋白:
将平衡好的beads加入到细胞裂解产物中,于4℃旋转混合结合30min-1h。
6. 清洗珠子:
根据实验要求选择使用溶液C或溶液D清洗beads。4℃,2,500g离心2分钟,或利用磁性分离,丢弃上清液。用500μl预冷的溶液C或溶液D重悬beads,4℃,2,500g条件下离心2分钟,或利用磁性分离,丢弃上清液并重复洗涤3次。
7.洗脱蛋白
方法一:
加入20μl 2×SDS-sample buffer重悬beads。95℃,加热10min充分变性,2,500g离心2分钟或利用磁性分离收集上清,收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。
方法二:
加入溶液E洗脱结合的蛋白,孵育时间30秒,期间不断混匀,2,500g离心2分钟或利用磁性分离收集上清,为了中和酸性的甘氨酸,立即加入5μl 1.0 M Tris(pH10.4)。
注意:为了提高洗脱效率可以重复这一步。收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。
注意事项:
1、关于裂解液与裂解液的选择:
裂解液A为温和裂解液,裂解液B为强裂解液,请根据自己实验样本选择相应的裂解液,如:若为胞质蛋白可选裂解液A或者A与B混合使用,若为核蛋白则可选择裂解液B。
漂洗液C和漂洗液D的选择(裂解液D为高盐溶液,可能会破坏蛋白间较弱的相互作用),若两个蛋白相互作用强,同时想减少非特异性,可选D;若两个蛋白相互作用弱的优先C。
2、尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
3、本产品仅供科研使用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。