快速BCA蛋白定量试剂盒的原理与传统BCA蛋⽩定量法类似，但采用了⼀种不同于BCA(Bicin-choninicAcid)的全新特殊的螯合剂，从而实现了对蛋⽩质浓度进⾏快速、稳定、灵敏的测定。其原理是在碱性环境下蛋⽩质分⼦中的肽键能与Cu2+形成络合物，将Cu2+还原成Cu+，Cu+与螯合物结合，从而发⽣颜⾊反应。

货号：B5003

存储条件：冰袋运输。试剂盒中A、B液室温或4℃保存；蛋⽩标准品（BSA）⻓时间不用，可置于-20℃保存，有效期12个⽉。

产品说明

快速蛋⽩定量试剂盒的原理与传统BCA蛋⽩定量法类似，但采用了⼀种不同于BCA(Bicin-choninicAcid)的全新特殊的螯合剂，从而实现了对蛋⽩质浓度进⾏快速、稳定、灵敏的测定。其原理是在碱性环境下蛋⽩质分⼦中的肽键能与Cu2+形成络合物，将Cu2+还原成Cu+，Cu+与螯合物结合，从而发⽣颜⾊反应。本试剂盒中的螯合剂可敏感特异地与Cu+结合，只需室温孵育5min即可形成稳定的橙⻩⾊⽔溶性复合物，而传统BCA法则需在37℃下孵育30min才可完成颜⾊反应。该橙⻩⾊的复合物在480nm处有强光吸收值，颜⾊的深浅与蛋⽩质浓度成正⽐，可根据吸收值的⼤小来测定蛋⽩质的含量。本试剂盒含有⼀系列浓度的蛋⽩质标准品溶液(BSA溶液)，即取即用，⽆需稀释，方便快捷。

1）简单快速---室温5min完成显⾊反应。

2）方便快捷---提供BSA即用型蛋⽩标准品，省去稀释步骤。

3）线性范围广---灵敏检测20-2000μg/mL浓度范围内有较好的线。

4）兼容性好---不受⼤部分样品中的化学物质的影响。 

操作说明（以微孔酶标仪为例）

一、配置显色工作液

1.计算显色工作液总量

⼯作液总量= (BSA标准品样本个数＋待测样本个数)×复孔数×每个样本显⾊⼯作液体积

举例：BSA标准品样本个数为8个，待测样本个数3个，复孔数3个。

显⾊⼯作液总量=(8个BSA标准品样本＋3个待测样本)×3个复孔×200μL(每个样本⼯作液体积) = 6.6mL

2.根据计算出的显色工作液需要总量，将试剂A和试剂B按照50:1的体积比，配制显色工作液，充分混匀。

【注意】

1）试剂B刚加⼊试剂A时，会出现灰蓝⾊沉淀，但只需混匀⼏秒钟，沉淀就会消失，形成透亮的绿⾊溶液；

2）建议⼯作液现用现配，在室温下，⼯作液会逐渐变为深绿⾊，但只要在1.5h内使用，对定量的准确性不会造成影响；

3）由于加样可能存在误差，建议配制BCA⼯作液时，多配制1~2个孔。

二、定量检测

1. 分别取即用型BSA标准品①~⑧各20μL加到96孔板中( BSA标准品使用前须充分溶解摇匀)；

2. 用 1xPBS 或 0.9%生理盐水将样品适当稀释(可以多作几个梯度，如2 倍、4 倍、8 倍稀释)，加 20 μL 到 96 孔板的样品孔中。

3. 各孔加入 200 uL 显色工作液，充分混匀，盖上 96 孔板盖，室温孵育 5min，即可进行检测。

【注意】由于颜色反应速度较快，须保证在 20-30 min 之内完成读值。如果必须在 30 min 后读值，可提前加入 50 μL 1M HCI 终止反应。 

4 . 用酶标仪测定每个样品及 BSA 标准品的 A₄₈₀，注意要减去空白对照( 标准品① +工作液)的 A₄₈₀;

5. 绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。

【注意】数据处理时需要去除明显错误的值。待测样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出待测样品的浓度。

6.注意事项

1)本产品可以采用酶标仪(微孔检测法)或者分光光度计(试管检测法)测定蛋白浓度，如使用普通的分光光度计测定，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大 BCA 工作液的用量使不小于最小检测体积， 样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

2)完成室温孵育5 min 后，须在 20~30 min 内完成检测，否则会影响蛋白定量的准确度。

3)实验操作规范，提高上样量的精确度。

4)每次测定都需做相应的标准曲线，因为显色反应与温度和时间的变化有关，精准蛋白定量宜每次都做标准曲线。

5)如待测样品中含较多的干扰物质(具体见附表)，可采用其它蛋白定量产品。

6)本产品仅限于专业人员用于科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内,

7)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。